目的 明確急性臭氧暴露后大鼠肺泡灌洗液來(lái)源的外泌體中微小 RNA(microRNA,miRNA)表達(dá)譜 的變化,并分析其與肺損傷的潛在關(guān)系。
方法 將成年雄性 Wistar 大鼠放入氣體染毒艙內(nèi)分別暴露于 0、0. 5 和 2 ppm 臭氧 6 h。 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后 24 h 麻醉大鼠,收集肺泡灌洗液并提取外泌體。 采用 miRNA-seq 技術(shù)檢測(cè)外泌體中 差異表達(dá)的 miRNA,使用 miRDB 數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)組間差異表達(dá) Top 10 miRNA 進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè),并對(duì)靶基因進(jìn)行 Gene Ontology 功能富集和 KEGG Pathway 分析。 利用 qRT-PCR 方法對(duì)表達(dá)豐度較高且組內(nèi)均一性較好的差異表達(dá) miRNA 進(jìn)行驗(yàn)證。
結(jié)果 與 0 ppm 組相比,0. 5 ppm 組大鼠肺泡灌洗液中外泌體 miRNA 有 8 個(gè)上調(diào)、55 個(gè)下調(diào),而 2 ppm 組中有 32 個(gè)上調(diào)、61 個(gè)下調(diào)。 與 0. 5 ppm 組相比,2 ppm 組大鼠肺泡灌洗液中外泌體 miRNA 有 90 個(gè)上調(diào)、 74 個(gè)下調(diào)。 差異表達(dá) Top 10 miRNA 的靶基因主要參與調(diào)控 DNA 結(jié)合、雜環(huán)化合物結(jié)合和影響轉(zhuǎn)錄等方面,并與 癌癥、MAPK、PIK3-AKT、TNF、ErbB、線粒體自噬和 FoxO 等信號(hào)通路密切相關(guān)。 qRT-PCR 結(jié)果表明測(cè)序結(jié)果基本可 靠。
結(jié)論 急性臭氧暴露可導(dǎo)致大鼠肺泡灌洗液中外泌體 miRNA 表達(dá)譜發(fā)生變化,差異 miRNA 可能參與了臭氧 暴露所致的肺組織炎癥、肺損傷等病理進(jìn)程。
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