目的 利用 CRISPR/ Cas9 基因編輯技術(shù)構(gòu)建糖原貯積癥 0(GSD0)型斑馬魚(yú)疾病模型,研究該病的發(fā)病進(jìn)程和機(jī)制。
方法 針對(duì) gys1 和 gys2 基因各設(shè)計(jì)一個(gè)靶點(diǎn),進(jìn)行基因編輯和突變體篩選;利用 qPCR 技術(shù)檢測(cè)早期發(fā)育階段和成魚(yú)不同組織基因表達(dá)情況,通過(guò) PAS 染色技術(shù)檢測(cè)糖原累積情況。
結(jié)果 獲得了 gys1 和 gys2 基因各兩種有效突變類型的 F2 純合突變體,成功構(gòu)建了 GSD0 型斑馬魚(yú)疾病模型。 gys1- / -純合子 F3 早期胚胎發(fā)育遲緩,48 hpf 內(nèi)全部死亡,而 gys2- / -純合子發(fā)育正常。 基因表達(dá)分析顯示,野生型斑馬魚(yú)早期發(fā)育階段(0 ~ 125 hpf),gys1 和 gys2 的表達(dá)先下降后上升,受精卵時(shí)期表達(dá)最高;成魚(yú)階段,gys1 在心臟和肌肉組織中高表達(dá), gys2 在肝中高表達(dá)。 PAS 糖原染色顯示,與野生型相比,gys1- / -心臟和肌肉沒(méi)有明顯的糖原積累,gys2- / -肝沒(méi)有明顯的糖原積累。
結(jié)論 gys1和gys2基因敲除斑馬魚(yú)模型的表型與小鼠模型相似,但也存在差異;Gys1敲除小鼠模型中 F2 大部分純合子死亡,斑馬魚(yú)gys1-/-純合子F2正常生長(zhǎng)發(fā)育,而自交產(chǎn)生的F3不能存活。 斑馬魚(yú) gys1 和 gys2 敲除突變體的制備,為進(jìn)一步研究人類糖原儲(chǔ)存障礙GSD0的發(fā)病進(jìn)程和機(jī)制提供了材料。
閱讀原文：糖原貯積癥0型斑馬魚(yú)疾病模型的構(gòu)建及表型分析.pdf
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