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【中國日報】中國科學家發現最小的RNA介導基因編輯工具,為基因治療帶來新希望

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    中國日報北京6月30日電2023年6月29日,中國科學院動物研究所/北京干細胞與再生醫學研究院王皓毅研究員、項光海博士和中國科學動物研究所張勇研究員團隊合作在NatureBiotechnology雜志在線發表題為EvolutionaryminingandfunctionalcharacterizationofTnpBnucleasesidentifyefficientminiaturegenomeeditors研究論文,報道了關于TnpB基因編輯系統開發的研究進展。

    基因編輯技術(Genomeediting)可謂近些年生命科學領域最重要的發現之一。該技術可實現基因組特定位點的精確修飾,能夠在目標基因位點插入、缺失或替換DNA序列。因此,基因編輯技術迅速成為生物學研究通用的核心技術,方便了科研探索;更重要的是,該技術還可以直接應用于遺傳病的治療、農業、畜牧業育種改造等方面,成為保障人們生命健康和改善生活質量的重要工具。

    基因編輯工具最核心的關鍵是一個可以人為設計使其定位到基因組上特定目標位點的蛋白,然后這個蛋白可以通過不同的效應模塊(如核酸酶用來剪切DNA,脫氨酶用來實現單堿基改變,逆轉錄酶是用來實現小片段DNA的插入等)來實現在目標基因位點的特定DNA序列改變。

    當前,最常用的CRISPR-Cas基因編輯系統Cas9和Cas12已經較為成熟;在這些系統中,Cas蛋白在特定非編碼RNA的引導下識別基因組中的目標位點,進而發揮核酸酶靶向剪切DNA的功能。然而,這些Cas蛋白大都超過1000個氨基酸,超出了基因治療遞送常用載體AAV(Adeno-associatedvirus)的承載能力,使得遞送它們進入目的細胞變得很困難。Cas蛋白通過融合脫氨酶或擬轉錄酶可以成為更為精確的堿基編輯和引導編輯工具,但融合蛋白尺寸更大,其有效表達和遞送更為困難。最新研究進展發現Cas12核酸酶的祖先TnpB蛋白尺寸更小,且同樣能在非編碼RNA(omegaRNA或reRNA)引導下切割DNA,具有和CRISPR-Cas系統相似的工作機制。因此,TnpB有望被開發為新的微型基因編輯工具,解決實際應用中因蛋白過大而遞送困難的問題。不僅如此,TnpB在目前已知的基因組存在中存在超過百萬份拷貝,是一個尚未被開發的巨大寶庫。篩選具有靶向編輯活性的TnpB蛋白,無疑將推進基因編輯工具的改良和應用。

    中國科學家們的這項研究創新性地發現TnpB系統中的關鍵元件和信息,TnpB蛋白、reRNA和TAM(分別相當于CRISPR-Cas系統的Cas9蛋白、gRNA和PAM),可以通過生物信息分析從基因組序列中直接預測獲得,從而實現了基因組中完整基因編輯系統的精確識別。該工作隨后對reRNA骨架以及影響TnpB編輯器活性的多方面因素進行了全面分析,建立了適用于TnpB編輯器的大規模注釋預測和篩選體系。基于該體系,該研究進一步從原核基因組中挖掘到了迄今發現的最小的RNA介導的基因編輯工具ISAam1(369個氨基酸)和ISYmu1(382個氨基酸)。其極小的蛋白尺寸不僅能夠適配不同的遞送平臺,而且在與脫氨酶、逆轉錄酶等衍生功能模塊融合后仍然較小,可以利用AAV遞送。這將有力推動在體基因治療的發展,有望為基因缺陷導致的疾病,如TTR相關淀粉樣變性病、β地中海貧血及較常見的高膽固醇病等提供更為有效的治療新方案。

    另外值得一提的是,本研究發現的新型基因編輯工具已申請國際專利,有助于我國發展基于基因編輯底層工具的相關產業。更為重要的是,本研究為未來針對基因組數據中數以百萬計的TnpB位點的高通量挖掘提供了高效通用的平臺,后續基于這一平臺的進一步挖掘將發現更多、更好的基因編輯工具,服務于全人類的健康與生活。

    (來源:中國日報2023年6月30日責任編輯:高琳琳)


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