目的 探索解整合素金屬蛋白酶 10(ADAM10)在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)成骨分化及脛骨骨折 愈合中的作用及可能機(jī)制。
方法 培養(yǎng) SD 大鼠 BMSCs,建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照(NC) shRNA pGFP?V?RS 載體的 BMSCs 并分為 sh?NC 組和 sh?NC+DMSO 組,建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 ADAM10 shRNA pGFP?V?RS 載體的 BMSCs 并分為 sh? ADAM10 組、sh?ADAM10+DMSO 組、sh?ADAM10+丙戊酸(VPA)組。 成骨誘導(dǎo) 14 d 后進(jìn)行茜素紅染色并檢測(cè) 405 nm 波長(zhǎng)吸光值、ALP 活性及 ADAM10、成骨標(biāo)志物基因(骨鈣素(OCN)、Runt 相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子 2(Runx2)、膠原蛋白-I (Col?I))、Notch1 信號(hào)通路分子(Notch 細(xì)胞內(nèi)片段(NICD)、Hes1)的表達(dá)水平。 建立 SD 大鼠的脛骨骨折模型,局 部注射 NC shRNA、ADAM10 shRNA 的 pCMV5 0 載體,4 周后觀察骨折愈合的情況以及基因表達(dá)水平。
結(jié)果 sh? ADAM10 組 BMSCs 中 ADAM10 的表達(dá)水平低于 sh?NC 組,成骨誘導(dǎo)后茜素紅染色的 405 nm 波長(zhǎng)吸光值、ALP 活性 及 OCN、Runx2、Col?I、NICD、Hes1 的表達(dá)水平均高于 sh?NC 組(P<0 05);sh?ADAM10+VPA 組 BMSCs 成骨誘導(dǎo)后 茜素紅染色的 405 nm 波長(zhǎng)吸光值、ALP 活性及 OCN、Runx2、Col?I 的表達(dá)水平均低于 sh?ADAM10+DMSO 組(P< 0 05);sh?ADAM10 組脛骨骨折大鼠的骨折愈合情況優(yōu)于 sh?NC 組,骨折部位 OCN、Runx2、Col?I、NICD、Hes1 的表達(dá) 水平均高于 sh?NC 組(P<0 05)。
結(jié)論 敲低 ADAM10 表達(dá)促進(jìn) BMSCs 的成骨分化及脛骨骨折愈合,這一作用與 抑制 Notch1 通路有關(guān)。
閱讀原文:ADAM10在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化及脛骨骨折愈合中的作用及可能機(jī)制.pdf