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甲基化檢測(cè)

DNA甲基化在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMTs)的作用下的CpG二核苷酸5’端的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?’-甲基胞嘧啶,是最早發(fā)現(xiàn)的修飾途徑之一。原核生物中甲基化多發(fā)生在CCA/TGG和GATC序列;真核生物中DNA甲基化一般發(fā)生在CpG位點(diǎn)上;哺乳動(dòng)物DNA甲基化只發(fā)生在CpG島的胞嘧啶,植物甲基化發(fā)生在CpG和CpNpG。甲基化會(huì)使胞嘧啶轉(zhuǎn)為5-甲基胞嘧啶,CpG位點(diǎn)在基因組是不常見(jiàn)的,主要密集于接近基因啟動(dòng)子的位置,統(tǒng)稱為CpG島。CpG位點(diǎn)的甲基化可以對(duì)基因表現(xiàn)有重要的影響。

DNA甲基化能引起染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、DNA構(gòu)象、DNA穩(wěn)定性及DNA與蛋白質(zhì)相互作用方式的改變,從而控制基因表 達(dá)。DNA甲基化通常抑制基因表達(dá),去甲基化則誘導(dǎo)了基因重新活化和表達(dá)。這種DNA修飾方式在不改變基因序列的前提下實(shí)現(xiàn)對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控。

甲基化研究方法

甲基化檢測(cè)的主要研究方法是基于亞硫酸氫鹽處理的甲基化特異性PCR(Methylation-specific PCR,MSP)和亞硫酸氫鹽測(cè)序(Bisulfite sequencing PCR,BSP)。 除此之外,還有高分辨率熔解曲線法(High Reso- lution Melting,HRM)和焦磷酸測(cè)序法。

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