大动物实验-动物试验中心-临床前研究「江苏美凤力医疗科技有限公司」

目的 探究清熱解毒方對痛風小鼠抗炎作用及對腸道菌群的影響。

方法 將 ４０ 只 ７～ ８ 周齡、體重 ２０～ ２２ ｇ 的 ＳＰＦ 級 Ｃ５７ＢＬ／ ６ 雄性小鼠隨機分為空白組（ＣＯＮ 組）、模型組（ＭＯＤ 組）、別嘌醇組（ＡＬＬＯ 組）、清熱解 毒方組（ＱＲＪＤ 組），第 １～ ３５ 天每天早上 ＣＯＮ 組灌胃 １０ ｇ ／ ０.１ ｍＬ 羧甲基纖維素，其余各組均灌胃氧嗪酸鉀（５００ ｍｇ ／ ｋｇ）＋酵母膏（１０ ｇ ／ ｋｇ）混懸液制備高尿酸血癥小鼠模型；第 ２９ 天在異氟烷麻醉下，往 ＣＯＮ 組小鼠右踝關節注 射 ５０ μＬ 無菌羧甲基纖維素，其余各組小鼠右踝關節注射等量尿酸鈉溶液（５０ ｍｇ ／ ｍＬ）制備痛風性關節炎模型，同 時各組每天灌服相應藥物進行治療；第 ３５ 天取材，取材小鼠禁食不禁水 ６ ｈ，檢測血尿酸、血肌酐、尿素氮等血液指 標，踝關節蘇木精－伊紅、番紅－固綠染色；踝關節免疫組化檢測白細胞介素－１０（ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ １０，ＩＬ?１０）、轉化生長因 子－β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ?β１，ＴＧＦ?β１）抗炎指標；收集小鼠盲腸內容物，采用 １６Ｓ ｒＤＮＡ 高通量測序法檢測腸 道菌群變化。

結果 （１）用藥治療 ７ ｄ 后，與 ＭＯＤ 組相比，ＱＲＪＤ 組能有效降低疾病模型小鼠血尿酸（Ｐ＜０.００１）、 肌酐（Ｐ＜０.０１）、尿素氮（Ｐ＜０.０５）濃度，有效保護腎功能。 （２）病理結果提示，與 ＭＯＤ 組相比，蘇木精－伊紅染色發 現 ＱＲＪＤ 組治療后，關節滑膜增生有所減少，炎癥細胞浸潤得到減輕；番紅－固綠發現中藥復方軟骨排列較前有序， 軟骨破壞較 ＭＯＤ 組減輕，基質未見失染。 （３）踝關節免疫組化結果提示 ＣＯＮ 組、ＭＯＤ 組 ＩＬ?１０、ＴＧＦ?β１ 未見明顯 升高；與 ＭＯＤ 組相比，ＱＲＪＤ 組的 ＩＬ?１０、ＴＧＦ?β１ 表達升高（Ｐ＜０.０５）。 （４）腸道菌群交互關系、多樣性上，與 ＣＯＮ 組 相比，ＭＯＤ 組特有的 ＯＴＵｓ 數目增加 ７５ 個，而 ＱＲＪＤ 能減少 ＭＯＤ 特有的 ＯＴＵｓ 數量，更接近 ＣＯＮ 組；４ 組間的 α 多 樣性未見明顯差異（Ｐ＞０.０５），而 β 多樣性發現 ＱＲＪＤ 組的菌群組成更趨向于 ＣＯＮ 組水平（Ｐ ＝ ０.００１）。 （５）腸道 菌群差異分析結果顯示，與 ＣＯＮ 組相比，ＭＯＤ 組 Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃａｃｅａｅ ｓｐｐ． 、Ｄｕｂｏｓｉｅｌｌａ ｓｐ． 、Ｔｙｚｚｅｒｅｌｌａ ｓｐ． 、Ｉｌｅｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ． 和 Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｌｅｓ ｓｐｐ． 等豐度增高（Ｐ＜ ０.０５）；與 ＭＯＤ 組對比，ＱＲＪＤ 組 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ． 、Ｌｉｇｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ． 和 Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ． 等豐度上升（Ｐ＜０.０５），且腸道菌群相互作用圖顯示菌群之間存在相互作用。 （６）腸道菌群與腎功 能、抗炎因子相關性分析中，Ｄｕｂｏｓｉｅｌｌａ ｓｐ． 、Ｔｙｚｚｅｒｅｌｌａ ｓｐ． 、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｌｅｓ ｓｐｐ． 的相對豐度與 ＳＵＡ、ＳＣＲ 呈顯著正相關 （Ｐ＜０.０５）；而 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ． 、Ｌｉｇｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ． 、Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ ｓｐｐ． 與 ＩＬ?１０、ＴＧＦ?β１ 抗炎因子呈正相關，其中與 ＴＧＦ?β１ 較為顯著（Ｐ＜０.０５）。 （７）ＣＯＧ 功能預測提示 ＱＲＪＤ 組功能集中于無機離子轉運和代謝、碳水化合物運輸與代謝等。

結論 ＱＲＪＤ 能有效調節免疫炎癥－腸道微生態紊亂從而治療痛風疾病，推測其防治痛風的機制是調節 腸道菌群多樣性以及調控 Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃａｃｅａｅ ｓｐｐ． 、Ｄｕｂｏｓｉｅｌｌａ ｓｐ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ． 等差異菌群豐度實現治療痛風的 目的。

閱讀原文：基于免疫炎癥－腸道微生態探討清熱解毒方對痛風小鼠治療作用的研究.pdf