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克隆形成實驗

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細胞克隆形成率即細胞接種存活率,表示接種細胞后貼壁的細胞成活并形成克隆的數量。貼壁后的細胞不一定每個都能增殖和形成克隆,而形成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活力的細胞。克隆形成率能夠反應細胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀。

1) 取對數生長期的細胞,分別用0.25%胰酶消化并吹打成單細胞狀態;

2) 將細胞懸液作梯度倍數稀釋,每組細胞分別以每皿50、100、200個細胞的梯度密度分別接種含培養基的培養皿中,輕輕轉動,使細胞分散均勻。將培養皿置于37℃、5% CO2培養箱中培養2~3周(根據細胞種類和生長狀況);

3) 經常觀察,當培養皿中出現肉眼可見的克隆時,終止培養。棄去上清液,用PBS小心浸洗2次。加4%多聚甲醛固定

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