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細(xì)胞侵襲/遷移實(shí)驗(yàn)(Transwell)

Transwell小室底層有一張通透性的膜(一般為聚碳酸酯膜),將其放置于孔板中,小室內(nèi)稱上室,培養(yǎng)板內(nèi)稱下室。由于聚碳酸酯膜有通透性,下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內(nèi)的細(xì)胞。應(yīng)用Transwell可研究下層培養(yǎng)液中的成分對(duì)上室細(xì)胞生長(zhǎng)、運(yùn)動(dòng)等的影響。

1.細(xì)胞共培養(yǎng):

1)下室中接種能夠分泌細(xì)胞因子或特定蛋白產(chǎn)物的細(xì)胞,在上室中接種效應(yīng)細(xì)胞;

2) 按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)培養(yǎng)一定時(shí)間;

3) 檢測(cè)效應(yīng)細(xì)胞的活力改變,亦可使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率,WB檢測(cè)細(xì)胞表面分子及凋亡相關(guān)分子的表達(dá)。

2.趨化實(shí)驗(yàn):

1) 在上室中接種相應(yīng)細(xì)胞,下室中接種能分泌細(xì)胞因子的細(xì)胞或加入特定細(xì)胞因子的培養(yǎng)基;

2)計(jì)數(shù)進(jìn)入下室的細(xì)胞,以反應(yīng)分泌產(chǎn)物或特定因子對(duì)細(xì)胞的趨化作用。

3.腫瘤細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)

1)在上室接種效應(yīng)細(xì)胞,下室中加入待測(cè)樣品(化合物、提取物或混合物等);

2)計(jì)數(shù)進(jìn)入下室的細(xì)胞量,可評(píng)價(jià)待測(cè)樣品對(duì)腫瘤細(xì)胞遷移的影響。

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