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編者：資源增量是實驗動物科技發展的核心任務，是實驗動物對生命科學研究提供支撐和服務的基礎和保障。自上世紀80 年代以來，我國老一輩實驗動物科學家苦心孤詣，在實驗動物資源研發工作中取得的多項開創新成果。

1988 年《實驗動物管理條例》發布實施，在實驗動物工作規范化、法制化管理，保障實驗動物和動物實驗的質量，推動我國科技發展和民生保障等方面發揮了重要作用。特別是在實驗動物資源標準化、新品種/品系開發和動物模型創制方面，取得了令人矚目的成果。

為此，借“科技資訊”之窗，陸續推出我國實驗動物專家在此領域所作的工作及取得的應用成果。

實驗用樹鼩種群的建立與標準化

王文廣 中國醫學科學院醫學生物學研究所

樹鼩（Tupaia Belangeris， Tree Shrew）是一種形似松鼠、吻部較長的小型哺乳動物，目前在分類學上屬于攀鼩目，介于于靈長目與食蟲目之間。樹鼩主要分布于南亞、東南亞及我國南部如云南?貴州?廣西?廣東?海南等省區，應用最為廣泛的是中緬樹鼩滇西亞種。樹鼩的生理生化及免疫學等生物學特性近似于人類，與靈長類動物的進化關系比嚙齒類動物更接近，在生命科學研究領域有很大的應用潛力，世界衛生組織在20世紀90 年代就建議用樹鼩代替大型靈長類動物進行科學實驗。

早期研究中使用的樹鼩大多來自野外，它們的遺傳背景不清，健康狀況未知，且個體差異較大，不利于科學研究的順利進行，因此就需要建立規模化的人工樹鼩種群，進行標準化的飼養管理和質量控制，逐步實現樹鼩資源的實驗動物化。我國從20 世紀70～80 年代就開始了樹鼩人工馴養繁殖研究，研究力量主要集中在昆明，如中國科學院昆明動物研究所、中國醫學科學院醫學生物學研究所和昆明醫科大學等科研院校。在國家政策引導和各級項目大力支持下，科研人員就樹鼩種質資源基地的建立和標準化進行了系統性研究，并取得了突破性成果。

一、 樹鼩的主要生物學特性

1.樹鼩的體型特征

成年樹鼩體長一般在140cm～190cm，體重在120g～180g。尾部毛發達，并向兩側分散，接近于體長。前后足均具有五趾，每趾都有發達而尖銳的爪，吻部尖長，耳較短，頭骨的眶后突發達，形成一骨質眼球，腦室較大。體毛粟黃色，頜下及腹部為線滅色毛。頸側有條紋，是區別樹鼩屬種的重要標志。

2.樹鼩的解剖學特點

樹鼩解剖學上特點是恥骨與坐骨左右形成1 公分軟骨接合部，鼓骨包已形成；犬齒細小，前臼齒寬大，齒式為2133/2133=36；脛骨與腓骨獨立；眼窩與顳窩隔開。

3.樹鼩的生態學特性

樹鼩生態上重要特點之一是膽小，易受驚。如長時間受驚，處于緊張狀態時，體重下降，睪丸縮小，臭腺發育受阻，當臭腺缺乏時，母樹鼩產后易吃仔甚至生育力喪失。

4.樹鼩的野外習性

野生樹鼩多在丘陵、平原近農舍旁的灌木丘林里活動，在土堆挖洞作穴，亦有在樹上筑巢，雌雄成對生活，不群居。常見單個出沒于叢林或村落，行動靈活，善于攀緣。樹鼩是雜食性動物，常以昆蟲、小鳥、五谷野果為食，更喜甜食如蜂蜜。

5.樹鼩的籠養特性

實驗室飼養的樹鼩喜在籠內作翻滾竄跳活動，飼養籠不宜過小，以黎明和黃昏時最為活躍，中午活動較少，晚上卷縮在籠的一角，以尾裹頸而睡。樹鼩喜動能量消耗較大，籠養時須注意有足夠的蛋白質飼料，營養缺乏則會體重減輕，毛無光澤，易患疾病而死亡，因此籠養時以標準化的飼料配合水果較好。兩雄相處常互相咬斗，因此不宜將兩只雄性同籠飼養。室內飼育時，除了保持15℃～28℃室溫和40%～70%的相對濕度等條件外，宜將雌雄樹鼩1:1 配對分籠飼育。樹鼩產育時不能驚動，否則易造成食仔或拒哺乳的情況。

6.樹鼩的繁育特性

樹鼩性成熟時間約為6 個月，懷孕期42 天左右，繁殖能力強，胎仔數為2～4 只，每年3～8 月為生殖季節。母樹鼩懷孕時，應及時分籠，將孕樹鼩轉到繁殖籠內單獨照料，分娩育仔。子樹鼩初生時體重約10 克（9.8±1.4 克），頭身長6.4±0.4 厘米，尾長3.8±0.29 厘米，剛生下的樹鼩全身無毛，皮膚粉紅，眼閉，只會蠕動，5～6 天皮膚變黑，開始長毛，14～21 天開眼，3 周開始走動，4 周可跳動，5～6 周斷奶而獨立生活。

二、實驗用樹鼩的標準化研究

1.承擔的研究項目

2006 年云南省科技基礎條件平臺計劃項目“樹鼩馴養繁殖實驗動物標準及丙型肝炎動物模型技術平臺建設”。

2009 年國家科技支撐計劃項目“野生動物人工種群的生物凈化及相關疾病動物模型的建立與評價——普通級樹鼩種群和HCV 感染模型的建立與評價”。

2011 年國家科技支撐計劃項目 “重大疾病動物模型及實驗動物資源的標準化及評價體系的建立”項目子課題“清潔級樹鼩種群和資源保存基地的建立”。

2013 年云南省科技基礎條件平臺計劃項目“云南省醫學實驗樹鼩標準化繁育平臺”。

2014 年國家科技支撐計劃項目“實驗用樹鼩的標準化研究和人類重大疾病樹鼩模型創建與應用集成示范”。

2015 年云南省聯合支持國家科技支撐計劃項目“實驗用樹鼩的標準化研究和人類重大疾病樹鼩模型創建與應用集成示范”。

2.建立的質量技術規范

在前期項目的支持下，完成了樹鼩生物學特性和免疫學指標數據測定，建立了樹鼩生理生化臨床指標數據庫；制訂了樹鼩生物學特性共性描述技術規范、樹鼩生物學特性數據采集技術規范和樹鼩生物學特性測定技術規范，共享于國家自然科技資源平臺網站。

樹鼩微生物、寄生蟲的檢測是質量控制的重要內容，在大量實驗數據的基礎上，建立了多種病原體檢測技術規范，如實驗樹鼩沙門氏菌、志賀菌檢、變形桿菌屬、皮膚病原真菌、寄生蟲、弓形蟲感染檢測標準操作規程，實驗樹鼩腺病毒、單純皰疹病毒、呼腸孤病毒、甲型肝炎病毒、輪狀病毒、柯薩奇病毒PCR 檢測標準操作規程等。

3.建立的樹鼩標準

樹鼩標準的制定是樹鼩實驗動物化的重要保證和標志，早在2010 年11 月云南省就發布了地方標準《實驗樹鼩(DB53/T328.1-328.5—2010)》，并于2011 年3 月1 日正式實施， 主要由昆明醫科大學制定，其內容共分為5 個部分：1.實驗樹鼩（第1 部分）：微生物學等級及檢測(DB53/T 328.1)； 2.實驗樹鼩（第2 部分）：

寄生蟲學等級及檢測(DB53/T 328.2)； 3.實驗樹鼩（第3 部分）：遺傳學質量控制(DB53/T 328.3)；4.實驗樹鼩（第4 部分）：配合飼料(DB53/T 328.4)；5.實驗樹鼩（第5 部分）：環境及設施(DB53/T 328.5)。2012年5 月又發布了由中國醫學科學院醫學生物學研究所和昆明理工大學制定的《實驗樹鼩》云南省地方標準第6～10 部分，即飼養管理、生物學特性數據測定、實驗基本操作技術、HCV 病毒感染樹鼩原代肝細胞模型制作和 HCV病毒感染樹鼩模型制作。樹鼩云南省地方標準的頒布填補了我國實驗樹鼩無質量標準的空白，為樹鼩人工繁殖和實驗研究提供了有力的技術支持。

近年來，隨著大量實驗數據的積累，人們也不斷地對樹鼩的地方標準進行修訂和完善，并努力向著應用范圍更廣的樹鼩國家標準靠近，由中國醫學科學院醫學生物學研究所制定的6 項樹鼩團體標準于2017 年5 月獲得全國實驗動物標準化委員會頒布，分別是（1）T/CALAS 08-2017 實驗動物 樹鼩微生物學等級及監測；（2）T/CALAS 09-2017 實驗動物 樹鼩寄生蟲學等級及監測；（3）T/CALAS 10-2017 實驗動物 樹鼩環境與設施；（4）T/CALAS 11-2017 實驗動物 樹鼩遺傳質量控制；（5）T/CALAS 12-2017 實驗動物 樹鼩配合飼料；（6）T/CALAS 13-2017 實驗動物 樹鼩病理學診斷規范。該團體標準的頒布實施，為樹鼩的標準化提供更科學的技術支持，并有力推動了樹鼩在全國范圍的推廣和應用。

4.成果

2012 年“樹鼩飼養繁殖種群建立及其在HCV 動物模型中的應用”，獲得2012 年度云南省科技進步一等獎；

2014 年“樹鼩實驗動物化種群建立及應用”項目，榮獲2014 年度中國實驗動物學會科學技術獎一等獎；

2014 年“云南橫斷山區小型哺乳動物冷適應模式及生態適應特征的研究”，榮獲2014 年度云南省自然科學獎三等獎；

2016 年“基于多種再生醫學細胞和動物模型創建的細胞治療技術研究”項目，榮獲2016 年度中國實驗動物學會科學技術獎一等獎。

三、實驗用樹鼩的應用研究

1.感染性疾病模型的研究

先后有人甲肝、乙肝、丙肝和丁肝病毒感染樹鼩，均在樹鼩體內發現病毒復制，并觀察到一定的臨床癥狀，其中以乙肝病毒和丙肝病毒模型研究成果較為突出。 Glebe 等發現HBV 可有效感染成年樹鼩原代肝細胞，證明pre-S1 結構域是樹鼩肝細胞感染HBV 必需的抗原，而這一點與HBV 感染人肝細胞的方式相似[1]。Yan 等以建立樹鼩肝細胞原代培養感染人類HBV 模型為基礎，成功證明了靈長類動物的鈉離子-牛磺膽酸共轉運蛋白為HBV 感染肝細胞的特異性受體[2]。謝春志[3]、馮悅[4]通過含HCV 的人血清感染樹鼩，均發現樹鼩可感染人HCV?Barth 等[5]研究發現樹鼩肝細胞上I 型清道夫受體、CD81 分子在HCV 包膜粘合到樹鼩肝細胞中起了重要作用?隨后，Tong Y 等[6]報道了樹鼩CD81 分子、SR-BI 分子和Claudin-1 分子可介導HCV 感染?此外，人們還發現H1N1 流感病毒[7]、腸道病毒EV71[8]和CA16[9]、登革病毒[10]、HSV 病毒[11]、EB 病毒[12]可感染樹鼩，可用來建立感染模型開展研究。

2.神經系統疾病模型

何保麗等[13]用β-淀粉樣蛋白(Aβ)側腦室注射建立樹鼩老年癡呆模型，從模型制作后第8 天開始，治療組樹鼩連續30 天灌胃給予天麻素，通過RT-PCR 檢測海馬腦源性神經營養因子(BDNF)mRNA 的表達，結果顯示天麻素能在一定程度上上調樹鼩海馬BDNF 的表達?

Ma 等[14]對樹鼩連續腹腔注射MPTP[3mg/(kg·d)]，5d 后出現典型的帕金森運動癥狀，且紋狀體DA 和DOPA水平顯著降低，腦中α-synuclein mRNA 水平升高，提示樹鼩可能是研究PD 發病機制的潛在動物模型?鄧苙等[15]的研究指出樹鼩MPTP 模型與6-OHDA 模型相比，PD 行為學特征更明顯，樹鼩的TH 陽性神經細胞呈雙側性減少，提示MPTP 經腹腔注射是制備樹鼩PD 模型的理想方法?

有學者注射不同劑量嗎啡到樹鼩體內以研究其耐受性和依賴性，注射嗎啡后同時使用納洛酮(1.25mg/kg體重)，發現樹鼩出現誘導條件性位置厭惡和戒斷癥狀[16]?Shen 等[17]使用樹鼩開展嗎啡成癮性研究，結果顯示肌肉注射嗎啡(5 或10 mg/kg)30~60 min 后樹鼩的運動活性顯著增加；條件性位置偏愛/厭惡實驗結果顯示，樹鼩偏愛有嗎啡的盒子，而納洛酮誘導條件性位置厭惡；以上研究表明樹鼩可以成為成癮行為和神經機制研究的候選者?

沈芳等[18]利用樹鼩先后建立了社交挫敗模型、習得性無助模型及慢性溫和應激模型，通過藥物抗抑郁實驗發現，氯丙咪嗪能夠逆轉抑郁動物的社交退縮行為，氟西汀對習得性無助行為具有翻轉作用，而卡貝縮宮素則對興趣下降、社交退縮及習得性無助行為均具有顯著的治療效果[19]。

3.眼科疾病模型研究

樹鼩眼球解剖及視覺系統與人類有高度相似性，感光細胞以視錐細胞為主，對形覺剝奪環境極為敏感，是研究形覺剝奪性近視的極佳動物模型。Siegwart 等[20]將自然睜眼后7、15、21、33、48、63d 樹鼩分別用半透明遮光板單眼剝奪12d 觀察眼軸的延長，發現樹鼩近視的易感期的高峰時段大約發生在睜眼后15～45d 之間?周廣龍等[21]通過單眼形覺剝奪建立樹鼩弱視模型，發現形覺剝奪引起的神經元損傷具有可恢復性，C□fos 基因和蛋白可能參與了形覺剝奪視皮質神經元的損傷及可塑性，結果顯示樹鼩有潛力成為良好的形覺剝奪弱視模型?

李妍等[22]采用基質注射茄病鐮刀菌孢子的方法首次成功建立茄病鐮刀菌性角膜炎樹鼩模型，并發現促炎因子IL-1β 和IL-6 及抑炎因子IL-10 在樹鼬茄病鐮刀菌性角膜炎炎癥反應機制中發揮重要作用。Samuels BC等[23]向成年樹鼩眼睛前房中注射25mg/mL 的磁珠溶液，從而誘發青光眼，視網膜神經纖維層(RNFL)顯著減少，視神經表現出與青光眼性視神經病變相一致的組織病理學變化。

4.代謝疾病模型研究

Li HY 等[24]采用高糖脂肪飲食與地塞米松聯合誘發了樹鼩2 型糖尿病。Wu XY 等[25]使用不同劑量的STZ (60、70 和80 毫克/千克)也建立了類似的2 型糖尿病樹鼩模型。此外，有人通過高糖高脂肪飲食和四次STZ 注射成功建立了糖尿病腎病樹鼩模型，并通過實驗證明骨髓移植也可以提高胰島素抵抗性[26]。

Xing Huijie 等配制不同濃度的食用酒精溶液供樹鼩飲用，2 周后引發生酒精代謝酶改變和脂肪肝樣病理改變[27]，而Meng 等人發現羅格列酮可以預防樹鼩的脂肪肝發育[28]。Zhang LQ 等[29]使用高脂肪、膽固醇和膽酸鹽飲食，成功地在樹鼩中誘發了非酒精性脂肪肝病(NAFLD)，發現Poloxamer 407 對脂蛋白脂肪酶的抑制改善了脂肪病的嚴重程度，減輕了炎癥，與小鼠脂肪肝病模型相比，樹鼩模型發病時間較短但癥狀更為明顯。

5.干細胞治療

在國家科技支撐計劃項目（2014BAI01B00）支持下，解放軍昆明總醫院已建立樹鼩臍帶和骨髓間充質干細胞體外分離、培養、擴增和鑒定技術體系及規范，制備儲存樹鼩臍帶和骨髓間充質干細胞2000 份；建立了樹鼩臍帶和骨髓間充質干細胞體外轉GFP 基因標記、BrdU 標記、DAPI 標記和順磁標記，為研究間充質干細胞在體內的生物學行為提供了分析測試方法；以樹鼩代謝綜合征[30]、糖尿病[31]、系統性紅斑狼瘡模型[32]為研究對象，進行了樹鼩臍帶間充質干細胞的療效評價，為干細胞臨床療法提供了技術參考。

四、實驗用樹鼩種群建立的意義

樹鼩是我國特色動物資源，開展樹鼩的實驗動物化和種質資源保存是一項國家戰略性任務， 而建立標準化和規模化的樹鼩種質資源基地，是實現其質量標準化、生產規模化、供應商品化和服務社會化的根本前提，具有重要應用價值和戰略意義。

建立標準化樹鼩種群，可有力促進其在生命科學領域的推廣應用，可為探討人類疾病致病機制和開發新型治療藥物等提供良好的實驗動物模型，滿足生命科學和醫藥產業發展的需求，促成相關科學研究的重大突破。

樹鼩種質資源基地的建立及標準化研究技術體系和成果，可為我國其他實驗動物新品種的研發、保存和共享提供借鑒，共同促進我國實驗動物種質資源保存工作的專業化和系統化。