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作為內(nèi)源性熱原，TNF-α能夠誘導(dǎo)發(fā)熱、細胞凋亡、惡病質(zhì)和炎癥，抑制腫瘤發(fā)生和病毒復(fù)制，并通過產(chǎn)生IL-1和IL-6的細胞對敗血癥作出反應(yīng)。TNF-α過度產(chǎn)生或信號傳導(dǎo)失調(diào)會通過促進炎癥、誘導(dǎo)骨侵蝕和關(guān)節(jié)損傷以及加劇組織損傷等方式導(dǎo)致自身免疫性疾病[2-3]。因此，TNF-α抑制劑是多種自身免疫疾病的首選治療藥物[4]。艾伯維的TNF-α抑制劑修美樂（阿達木單抗）自上市以來全球累計銷售額超過2000億美元，盡管面臨多方圍剿，但TNF-α抑制劑市場仍未達到巔峰。據(jù)調(diào)研機構(gòu)Precedence Research預(yù)測，2023年全球TNF-α抑制劑市場規(guī)模為420.7億美元，預(yù)計到2033年將達到506.3億美元，全球自身免疫性疾病發(fā)病率的上升將推動對TNF-α抑制劑藥物的持續(xù)需求[5]。

圖2 2024年至2033年TNF-α抑制劑藥物的市場規(guī)模與增長預(yù)測[5] 

DBA/1小鼠是一種常見的近交系品系，廣泛用于關(guān)節(jié)炎誘導(dǎo)造模、神經(jīng)生物學(xué)、動脈粥樣硬化、自身免疫性腎炎和乳腺腫瘤等領(lǐng)域研究[6]。膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎（CIA）模型是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）小鼠的“金標準”，其誘導(dǎo)效果與MHC Ⅱ類分子密切相關(guān)。基于高敏感性DBA/1品系構(gòu)建的CIA小鼠具有較高的發(fā)病率和良好的重復(fù)性，成為相關(guān)研究的首選模型[7]。在接受Ⅱ型膠原蛋白免疫后，DBA/1小鼠會出現(xiàn)與滑膜炎及軟骨和骨骼侵蝕相關(guān)的嚴重類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，并伴有自身免疫反應(yīng)。另一方面，研究表明，表達人類TNF-α的DBA/1轉(zhuǎn)基因品系較C57BL等品系關(guān)節(jié)炎發(fā)病速度更快、病理組織中的TNF-α活性更高且發(fā)病機制與人類疾病符合[8]。因此，DBA/1小鼠無疑是研究類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）等TNF-α相關(guān)自身免疫疾病的首選品系。 

圖3 DBA/1小鼠在膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎（CIA）中呈現(xiàn)更高的臨床評分[9] 

以DBA/1小鼠為背景構(gòu)建TNF人源化小鼠模型，將有助于多種誘導(dǎo)性自身免疫性疾病模型構(gòu)建，并加速更多靶向人類TNF療法的研發(fā)和藥效評價。賽業(yè)生物通過將DBA/1小鼠的Tnf基因原位替換為包含5'UTR和3'UTR區(qū)域的人源TNF基因，成功構(gòu)建了DBA/1-hTNF小鼠模型（產(chǎn)品編號：I001195）。該模型能成功表達人源TNF基因和蛋白，以下是該模型的詳細表型信息。 

檢測數(shù)據(jù)顯示，10周齡的DBA/1-hTNF小鼠成功表達人源TNF基因且不表達小鼠Tnf基因。 

圖4 DBA/1-hTNF小鼠和DBA/1野生型小鼠人源TNF基因和小鼠Tnf基因表達的RT-qPCR檢測 

通過腹腔注射劑量為1.5mg/kg的脂多糖（LPS）誘導(dǎo)10周齡小鼠體內(nèi)TNF蛋白高表達，并在誘導(dǎo)6小時后采集小鼠血清進行ELISA檢測。數(shù)據(jù)顯示，DBA/1野生型小鼠經(jīng)LPS處理后高表達鼠源TNF蛋白，而DBA/1-hTNF小鼠在LPS誘導(dǎo)后顯著高表達人源TNF蛋白，且不表達鼠源TNF蛋白。 

圖5 DBA/1-hTNF小鼠和DBA/1野生型小鼠在LPS刺激后人源和小鼠TNF蛋白的表達情況 

DBA/1-hTNF小鼠（產(chǎn)品編號：I001195）成功表達人源TNF基因和蛋白，在LPS誘導(dǎo)后可實現(xiàn)人源TNF蛋白的高表達。基于DBA/1小鼠背景品系的自身免疫性疾病易感性，DBA/1-hTNF小鼠可用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）等自身免疫性疾病誘導(dǎo)模型的快速穩(wěn)定構(gòu)建，以及靶向人類TNF治療藥物的開發(fā)和藥效評估。