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潰瘍性結腸炎（Ulcerative Colitis，UC）是一種慢性非特異性腸道炎癥性疾病，其病因尚不明確，目前被世界衛生組織（WHO）列為“現代難治病”。西醫對于本病的藥物治療手段主要為激素、免疫系統調節劑等，但長期服用對肝、腎毒性較大，并可導致機體免疫力低下。從中醫的角度來看，UC屬于“痢疾”“泄瀉”“便血”等范疇，隨著病情發展還會出現諸如由虛轉實、由寒轉熱，或虛中夾實、寒熱錯雜等病機的轉化。《潰瘍性結腸炎中醫診療專家共識意見（2017)》根據其復雜多樣的病因病機對UC進行了辨證分型，針對不同證型UC的辨證論治更符合對該病的中醫治療策略。在與UC相關的動物實驗研究中，最常用的化學造模誘導劑包括2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）和葡聚糖硫酸鈉（DSS）。上述造模方式僅可建立動物的結腸炎癥模型，但符合中醫證候特點的UC動物模型建立方法的報道較少。

在現有與上述證型相關的研究中，多涉及濕熱蘊結證、脾虛濕困證和肝郁脾虛證等，而對于寒熱錯雜證型UC模型的研究較少。“寒熱錯雜證”是一種機體同時出現寒象與熱象的證候，寒熱錯雜型UC既常見于單獨證型，又揭示了UC疾病本身的錯綜復雜，且UC的總病機與寒熱錯雜、氣滯血瘀相關。對“寒熱錯雜型UC”這一重要分型的研究現狀，限制了該分型UC的病因病機、中藥藥效和中醫治療手段的研究，故基于病證結合特點，細化寒熱錯雜型UC動物模型的相關操作，將有利于相關的辨病分析與辨證研究。

烏梅丸是《傷寒論》中治療基本病機為“寒熱錯雜，上熱下寒”厥陰病的中藥方劑。有研究顯示，烏梅丸對大承氣湯與TNBS/乙醇混合液聯合建立的寒熱錯雜型UC具有良好的治療作用。從以方測證的角度反觀，大承氣湯與TNBS/乙醇聯合可成功誘導寒熱錯雜證UC的產生，但上述模型研究中缺乏對“寒熱錯雜證”的實驗評價指標研究，包括具體的造模周期、造模劑量等參數。因此，本研究擬以寒熱錯雜型UC的中醫病證結合模型為研究對象，以相關客觀寒/熱指標和炎癥指標為依據，在“虛寒證”基礎上繼續復制UC疾病模型，并對不同造模組的結果進行綜合評價，優選寒熱錯雜型UC大鼠模型的最佳造模方案，進而為相關動物模型研究提供實驗依據。

分組與造模

48只大鼠適應性飼養1周后，隨機分為6組，包括空白組、大承氣湯組及4個模型組（模型1～4組），每組8只。空白組全程給予氯化鈉溶液（9 g/L）灌胃（10 mL/kg）。

根據文獻方法制備大承氣湯，即取酒大黃12 g、厚樸15 g（去皮）、炙枳實12 g、芒硝9 g，加10倍量水將除酒大黃外的飲片浸泡30 min，煎煮30 min后加入大黃繼續煎煮10min，過濾；藥渣再加5倍量水煎煮30 min，過濾，將兩次藥液合并后濃縮至1 g/mL（以大黃計）。本研究所用飲片均根據《中華人民共和國藥典（2020年版）：一部》進行質量檢查，均為合格飲片。

造模第1階段（第1～10天）：除空白組給予氯化鈉溶液（9 g/L）灌胃（10 mL/kg）外，其余各組給予大承氣湯灌胃10 d(10 mL/kg）誘導虛寒證模型。大承氣湯組10 d后禁食不禁水24 h，麻醉后進行腹主動脈取血，并取材；模型1～4組10 d后行UC造模。

造模第2階段（第11～18天）：實驗第11天，空白組大鼠正常進食、飲水，模型1～4組大鼠采用異氟烷吸入麻醉，將聚乙烯管頂端涂適量石蠟油，插至大鼠結腸內距肛門口約8 cm處；隨后模型1～4組大鼠分別給予TNBS(70 mg/kg）與體積分數50%乙醇（1∶1）混合液、TNBS(50 mg/kg）與體積分數50%乙醇（1∶1）混合液、TNBS(70 mg/kg）與體積分數25%乙醇（1∶1）混合液、TNBS(50 mg/kg）與體積分數25%乙醇（1∶1）混合液緩慢灌腸。灌腸完畢后夾住大鼠肛門，將大鼠頭朝下懸掛5 min，再平躺5 min，至其自然清醒后恢復自由進食、飲水。各組造模過程見圖1。

在大承氣湯誘導“虛寒證”模型的基礎上，乙醇濃度對UC造模成功與否有較大影響。經實驗研究比較可知，采用TNBS溶液（劑量70 mg/kg）與體積分數50%乙醇溶液按1∶1混勻制得的TNBS/乙醇混合液的造模效果更優，可成功建立寒熱錯雜型UC大鼠模型。該模型以中醫基礎理論為支撐，中醫證候與經典UC方法相結合，獲得的符合病證結合特點的寒熱錯雜型UC模型，可為相關實驗研究動物模型的建立提供參考，應用于中醫藥相關干預手段作用研究。值得關注的是，該病證結合動物模型模擬的是寒熱錯雜型UC，其病機是人體飲食不節、苦寒太過、傷及脾胃，使得脾虛不運、脾陽不升、氣機失調，在該動物模型上進行藥效評價時應加以辨別。此外，臨床實踐中在疾病的發展過程中可能出現證型上的相互轉化，且中醫證候的動物模型不易采集“舌象、脈象”等體征信息及對病灶感受的問診反饋，病證結合UC動物模型仍需進一步的探索和完善。

Source: 上海中醫藥雜志. 2024, 58 (08)，基于病證結合特點構建寒熱錯雜型潰瘍性結腸炎大鼠模型的實驗研究，DOI：10.16305/j.1007-1334.2024.2311068